हैदराबाद में डेंगू टेस्ट - प्रकार, संकेत, लागत

डेंगू परीक्षण के विभिन्न प्रकारों को मोटे तौर पर निम्नलिखित श्रेणियों में वर्गीकृत किया गया है।

• डेंगू न्यूक्लिक एसिड का पता लगाना
• आरटी-पीसीआर
• वास्तविक समय आरटी-पीसीआर
• डेंगू एनएस1 परीक्षण (एनएस1 एंटीजन परीक्षण) या गैर-संरचनात्मक प्रोटीन1 (एनएस1) एंटीजन परख
• डेंगू सीरोलॉजी परीक्षण या डेंगू एंटीबॉडी परीक्षण
• डेंगू के लिए आईजीएम एलिसा परीक्षण (डेंगू आईजीएम परीक्षण)
• डेंगू के लिए आईजीजी एलिसा परीक्षण (एंटीबॉडी आईजीजी परीक्षण)
• आईजीएम/आईजीजी अनुपात
• डेंगू के लिए IgA ELISA परीक्षण
• हेमाग्ग्लूटिनेशन-अवरोधन परीक्षण
• डेंगू रक्त परीक्षण
• पूर्ण रक्त गणना
• डेंगू नैदानिक मूल्यांकन
• टूर्निकेट टेस्ट डेंगू
• डेंगू वायरस अलगाव

डेंगू न्यूक्लिक एसिड का पता लगाना



न्यूक्लिक एसिड का पता लगाना एक महत्वपूर्ण तकनीक है जो कुछ न्यूक्लियोटाइड अनुक्रमों का पता लगाने, रोगाणु की उपस्थिति या बीमार स्थिति की प्रारंभिक शुरुआत का पता लगाने में सक्षम है।

• आरटी-पीसीआर: रिवर्स ट्रांसक्रिप्शन-पॉलीमरेज़ चेन रिएक्शन (RT-PCR) में वायरस आइसोलेशन की तुलना में तेज़ टर्नअराउंड समय और उच्च संवेदनशीलता होती है। न्यूक्लिक एसिड का निष्कर्षण और शुद्धिकरण, न्यूक्लिक एसिड का प्रवर्धन, और प्रवर्धित उत्पाद का पता लगाना और उसका लक्षण वर्णन RT-PCR की तीन मूलभूत प्रक्रियाएँ हैं।
  
  पीसीआर उत्पादों को बढ़ाने या पता लगाने के लिए प्रयुक्त विधि और सबटाइपिंग के लिए प्रयुक्त विधि, प्राइमरों द्वारा लक्षित जीनोम के क्षेत्र पर निर्भर करती है, तथा वायरस पृथक्करण की तुलना में आरटी-पीसीआर प्रक्रियाओं की संवेदनशीलता 80% से 100% तक हो सकती है।
  
  
• वास्तविक समय आरटी-पीसीआर: प्राइमर जांच और प्रत्येक डेंगू सीरोटाइप के लिए विशिष्ट जोड़े का उपयोग करके, वास्तविक समय आरटी-पीसीआर परीक्षण एक ही चरण में वायरल आरएनए को मात्रात्मक रूप से माप सकता है। एक फ्लोरोसेंट जांच का उपयोग एक अनुकूलित पीसीआर मशीन के भीतर वास्तविक समय में प्रतिक्रिया उत्पादों का पता लगाने के लिए किया जाता है।
  
  
• डेंगू एनएस1 परीक्षण या गैर-संरचनात्मक प्रोटीन1 (एनएस1) एंटीजन परख: डेंगू NS1 एंटीजन परीक्षण डेंगू वायरस के गैर-संरचनात्मक प्रोटीन NS1 का पता लगाते हैं। डेंगू संक्रमण के दौरान, यह प्रोटीन रक्तप्रवाह में स्रावित होता है। डेंगू वायरस संक्रमण के तीव्र चरण में, NS1 का पता लगाया जा सकता है। लक्षणों के पहले 0-7 दिनों के दौरान, NS1 परीक्षण आणविक परीक्षणों जितना ही संवेदनशील हो सकता है। 7वें दिन के बाद NS1 परीक्षण की सलाह नहीं दी जाती है। इसे डेंगू NS1 ELISA परीक्षण के रूप में भी जाना जाता है, जब वास्तविक समय पॉलीमरेज़ चेन रिएक्शन के साथ ELISA के आधार पर NS1 का पता लगाया जाता है।
  
  NS1 एंटीजन एक ग्लाइकोप्रोटीन है जिसे सभी फ्लेविवायरस द्वारा संश्लेषित किया जाता है और संक्रमण के तीव्र चरण के दौरान संक्रमित स्तनधारी कोशिकाओं से स्रावित किया जाता है। यह डेंगू एंटीजन परीक्षण विश्लेषण सुसंगत है, जो डेंगू संक्रमण के लिए काफी उच्च संवेदनशीलता और अत्यधिक उच्च विशिष्टता दर्शाता है। कुछ शोध अध्ययनों से पता चलता है कि प्राथमिक संक्रमण (> 90%) में NS1 एंटीजन का पता लगाने के लिए द्वितीयक संक्रमण (60-80%) की तुलना में अधिक संवेदनशीलता होती है। उच्च NS1 एंटीजन स्तरों को अधिक वायरेमिया स्तरों से भी जुड़ा हुआ दिखाया गया है, जो यह सुझाव देता है कि वे गंभीर बीमारी के संभावित मार्कर के रूप में काम कर सकते हैं। डेंगू ns1 एंटीजन रेंज तीव्र चरण में 0.5-2 μg/ml और स्वास्थ्य लाभ चरण के नमूनों में <0.04 μg/ml से भिन्न होती है।
  

डेंगू सीरोलॉजी परीक्षण या डेंगू एंटीबॉडी परीक्षण

• डेंगू के लिए आईजीएम एलिसा परीक्षण: इसे MAC-ELISA (इम्यूनोग्लोबुलिन एम एंटीबॉडी-कैप्चर एंजाइम-लिंक्ड इम्यूनोसॉर्बेंट एसे) या डेंगू IgM टेस्ट के नाम से भी जाना जाता है। डेंगू-विशिष्ट एंटीजन (DEN-1, -2, -3, और -4) के एक से चार सीरोटाइप को कैप्चर किए गए एंटी-डेंगू IgM एंटीबॉडी से चिपकाया जाता है। इन एंटीबॉडी का पता मोनोक्लोनल या पॉलीक्लोनल डेंगू एंटीबॉडी द्वारा लगाया जाता है, जो एंजाइम के साथ (सीधे या अप्रत्यक्ष रूप से) संयुग्मित होकर, एक गैर-रंगीन सब्सट्रेट को रंगीन उत्पादों में बदल देते हैं, जिसे आगे स्पेक्ट्रोफोटोमीटर द्वारा मापा जाता है।
  
  इम्यूनोग्लोबुलिन एम का पता सीरम, फिल्टर पेपर पर खून या लार के नमूनों से लगाया जा सकता है, जो बुखार शुरू होने के लगभग 5 दिन बाद एकत्र किए जाते हैं। यदि बुखार शुरू होने के पांच दिन से अधिक समय बाद परीक्षण किया जाता है, तो MAC-ELISA की संवेदनशीलता और विशिष्टता अच्छी पाई गई है।

• डेंगू के लिए आईजीजी एलिसा परीक्षण: इस परीक्षण का उपयोग हाल ही में या पहले हुए डेंगू संक्रमणों का पता लगाने के लिए किया जाता है, जहाँ MAC-ELISA की तरह ही समान एंटीजन का उपयोग किया जाता है। E/M-विशिष्ट कैप्चर ELISA (GAC) का उपयोग करके संक्रमण के 10 महीने बाद तक IgG एंटीबॉडी का पता लगाया जा सकता है। तीव्र और स्वस्थ होने वाले युग्मित सीरम में डेंगू वायरस संक्रमण के IgG एंटीबॉडी में चार गुना या उससे अधिक की वृद्धि का उपयोग हाल ही में हुए संक्रमण का पता लगाने के लिए किया जा सकता है; हालाँकि, E/M एंटीजन-लेपित अप्रत्यक्ष IgG ELISA द्वारा मूल्यांकन किए जाने पर IgG एंटीबॉडी आजीवन रहते हैं।
  
  यह तकनीक फिल्टर पेपर पर संरक्षित सीरम, प्लाज्मा और रक्त के नमूनों में IgG एंटीबॉडी का पता लगाने की अनुमति देती है और इसका उपयोग प्राथमिक या द्वितीयक डेंगू संक्रमण की उपस्थिति का पता लगाने के लिए किया जा सकता है। IgG ELISA परीक्षण में फ्लेविवायरस सीरोकॉम्प्लेक्स समूहों के साथ विशिष्टता का अभाव है।

• आईजीएम/आईजीजी अनुपात: प्राथमिक और द्वितीयक डेंगू वायरल एजेंटों को वायरस ई/एम प्रोटीन-विशिष्ट आईजीएम/आईजीजी अनुपात को मापकर पहचाना जा सकता है, जहां आईजीएम कैप्चर एलिसा और आईजीजी कैप्चर एलिसा परीक्षण सबसे व्यापक रूप से उपयोग किए जाने वाले परीक्षण हैं। 1.2- 1.4 से अधिक अनुपात प्राथमिक संक्रमण को इंगित करता है, जबकि 1.2- 1.4 से कम द्वितीयक संक्रमण को इंगित करता है।

• डेंगू के लिए IgA ELISA परीक्षण: सीरम एंटी-डेंगू IgA का पता आमतौर पर एंटी-डेंगू वायरल IgA कैप्चर ELISA (AAC-ELISA) का उपयोग करके IgM के एक दिन बाद लगाया जाता है। बुखार की शुरुआत के बाद लगभग आठवें दिन, IgA टाइटर अपने उच्चतम बिंदु पर पहुँच जाता है और फिर तेज़ी से घटता है जब तक कि यह 40वें दिन तक पता लगाने योग्य नहीं हो जाता।

• हेमाग्ग्लूटिनेशन-अवरोधन परीक्षण: डेंगू एंटीजन की आरबीसी को एकत्रित करने की क्षमता हीमाग्लूटिनेशन-अवरोधन परीक्षण का आधार है। एंटी-डेंगू एंटीबॉडी युक्त सीरम एग्लूटिनेशन प्रक्रिया को रोकता है, जिसे HI परीक्षण में मापा जाता है। प्राथमिक संक्रमण की प्रतिक्रिया 5वें दिन से पहले एकत्र किए गए तीव्र चरण के रक्त में एंटीबॉडी के निम्न स्तर और उसके बाद HI एंटीबॉडी टिटर के लगातार बढ़ने से परिभाषित होती है। द्वितीयक डेंगू संक्रमण के दौरान, HI एंटीबॉडी टिटर तेजी से बढ़ता है, जो आम तौर पर 1:1280 से अधिक होता है।

डेंगू रक्त परीक्षण

डेंगू के लिए सीबीसी परीक्षण:डेंगू बुखार में श्वेत रक्त कोशिकाओं (WBC) की संख्या में कमी (ल्यूकोपेनिया) < 5000 कोशिकाएं/मिमी3, प्लेटलेट की संख्या (थ्रोम्बोसाइटोपेनिया) < 150,000 कोशिकाएं/मिमी3, तथा हेमेटोक्रिट मान में वृद्धि (5-10%) होती है, तथा प्लाज्मा रिसाव का कोई साक्ष्य नहीं मिलता है।

डेंगू रक्तस्रावी बुखार (डी.एच.एफ.) के मामले में, प्लाज़्मा रिसाव के सबूत हैं, जो जलोदर या फुफ्फुस बहाव के लक्षण हैं। डेंगू रक्त परीक्षण रिपोर्ट से डेंगू संक्रमण के नैदानिक निदान मापदंडों का पता चलता है, जैसे कि प्लेटलेट काउंट में कमी <100,000 cells/mm3 और हेमटोक्रिट में 20% से अधिक की वृद्धि। कभी-कभी, डेंगू बुखार में प्लेटलेट काउंट में 100,000 cells/mm3 से कम की कमी का पता लगाया जा सकता है, लेकिन यह आमतौर पर डी.एच.एफ. में हमेशा देखा जाता है।

डेंगू नैदानिक मूल्यांकन

टूर्निकेट परीक्षण डेंगू:डेंगू बुखार टूर्निकेट परीक्षण एक तरह की शारीरिक जांच है जो डेंगू बीमारी की पहचान और स्तरीकरण कर सकती है। डेंगू वायरस के संक्रमण के परिणामस्वरूप केशिका पारगम्यता बढ़ सकती है, जहां टूर्निकेट परीक्षण इन छोटी केशिकाओं पर लगातार दबाव प्रदान करके फायदा उठाता है। इसके परिणामस्वरूप पेटीचिया का विकास होता है, जो डेंगू रक्तस्रावी बुखार (डीएचएफ) और डेंगू बुखार के रोगियों में त्वचा पर पिनपॉइंट, गैर-उभरे, बैंगनी-लाल धब्बे होते हैं।

टूर्निकेट टेस्ट डेंगू प्रक्रिया में मरीज की ऊपरी बांह पर सिस्टोलिक और डायस्टोलिक रक्तचाप के बीच ब्लड प्रेशर कफ को फुलाना शामिल है। पांच मिनट के बाद, पेटीकिया का निर्माण होगा; यदि किसी क्षेत्र में गिने गए पेटीकिया की संख्या एक निर्दिष्ट मात्रा (एक वर्ग इंच क्षेत्र में 20 पेटीकिया से अधिक या बराबर) से अधिक है, तो परीक्षण के परिणाम को डेंगू बुखार में एक सकारात्मक टूर्निकेट परीक्षण माना जाता है।

डेंगू वायरस अलगाव

वायरस अलगाव के नमूनों को संक्रमण के शुरुआती दौर में, वायरेमिया की अवधि के दौरान (आमतौर पर 5 दिन से पहले) एकत्र किया जाना चाहिए। वायरस को सीरम, प्लाज्मा और परिधीय रक्त मोनोन्यूक्लियर कोशिकाओं से पुनर्प्राप्त किया जा सकता है, और इसे शव परीक्षण में भी एकत्र किया जा सकता है। एकत्र किए गए नमूनों को 24 घंटे तक भंडारण के लिए +4 °C और +8 °C के बीच रखा जाएगा। लंबे समय तक भंडारण के लिए डीप फ्रीजर या लिक्विड नाइट्रोजन स्टोरेज में -70 °C की सिफारिश की जाती है।

डेंगू के लिए त्वरित निदान परीक्षण

डेंगू रैपिड टेस्ट का उपयोग हाल ही में हुए डेंगू संक्रमण की पुष्टि के लिए अधिक बार किया जा रहा है, क्योंकि इसके परिणाम कम समय में मिल जाते हैं और इसका उपयोग करना आसान है। डेंगू रैपिड टेस्ट के परिणाम हाल ही में हुए डेंगू संक्रमण की तीव्र और सटीक पुष्टि प्रदान करते हैं।



डेंगू संक्रमण का नैदानिक लक्षण वर्णन उम्र और मेजबान की प्रतिरक्षा और अंतर्निहित चिकित्सा स्थिति जैसे कारकों पर निर्भर करता है। हाल ही में हुए डेंगू संक्रमण का सटीक प्रयोगशाला निदान महत्वपूर्ण है क्योंकि पता लगाने में देरी से डेंगू का गंभीर जोखिम बढ़ जाता है और इससे बीमारी का खराब परिणाम हो सकता है। डेंगू के लिए पारंपरिक नैदानिक परीक्षण वायरस अलगाव, प्रतिरक्षा-आधारित परख या पॉलीमरेज़ चेन रिएक्शन (आणविक-आधारित) के माध्यम से किया जा सकता है। हालाँकि, ये तरीके महंगे हैं, विशेष उपकरणों की आवश्यकता होती है और इनका परिणाम काफी लंबा होता है। इसलिए, पूरे रक्त, सीरम या प्लाज्मा में IgM एंटीबॉडी, डेंगू NS1 एंटीजन और IgG एंटीबॉडी का पता लगाने के लिए डेंगू रैपिड डायग्नोस्टिक टेस्ट (RDT) विकसित किए गए हैं। इन RDT के परिणाम, जो इम्यूनोक्रोमेटोग्राफ़िक दृष्टिकोण पर आधारित हैं, 30 मिनट से भी कम समय में प्राप्त किए जा सकते हैं।

एलिसा और आरडीटी के बीच अंतर